- A cosa serve
- Come è fatto
- Tipi di elettroforesi
- 1. Elettroforesi dell'emoglobina
- 2. Elettroforesi proteica
L'elettroforesi è una tecnica di laboratorio eseguita con l'obiettivo di separare le molecole in base alle loro dimensioni e alla carica elettrica in modo da poter effettuare la diagnosi delle malattie, verificare l'espressione delle proteine o identificare i microrganismi.
L'elettroforesi è una procedura semplice ed economica, utilizzata nella routine di laboratorio e in progetti di ricerca. Secondo lo scopo dell'elettroforesi, potrebbe essere necessario eseguire altri test ed esami per raggiungere una diagnosi, ad esempio.
A cosa serve
L'elettroforesi può essere eseguita per diversi scopi, sia nei progetti di ricerca che nella diagnosi, poiché è una tecnica semplice ed economica. Pertanto, l'elettroforesi può essere eseguita per:
- Identificare virus, funghi, batteri e parassiti, essendo la più comune questa applicazione in progetti di ricerca; Test di paternità; Controllare l'espressione delle proteine; Identificare le mutazioni, utile nella diagnosi della leucemia, ad esempio; Analizzare i tipi di emoglobina circolante, essendo utile nella diagnosi di anemia falciforme; Valutare la quantità di proteine presenti nel sangue.
Secondo lo scopo dell'elettroforesi, potrebbe essere necessario eseguire altri test complementari affinché il medico completi la diagnosi.
Come è fatto
Per eseguire l'elettroforesi è necessario il gel, che può essere di poliacrilammide o agarosio a seconda dell'obiettivo, tampone e vasca di elettroforesi, marcatore di peso molecolare e un colorante fluorescente, oltre a un dispositivo di illuminazione UV o LED, noto anche come transilluminatore.
Dopo aver preparato il gel, è necessario posizionare un oggetto specifico in modo che i pozzetti vengano realizzati nel gel, comunemente chiamato pettine, e lasciare che il gel si depositi. Quando il gel è pronto, basta applicare le sostanze ai pozzetti. Per questo, un marker di peso molecolare deve essere posizionato in uno dei pozzetti, un controllo positivo, che è la sostanza che si conosce di cosa si tratta, un controllo negativo, che garantisce la validità della reazione e i campioni da analizzare. Tutti i campioni devono essere miscelati con un colorante fluorescente, in questo modo è possibile visualizzare le bande sul transilluminatore.
Il gel con i campioni deve essere posizionato nella vasca di elettroforesi, che contiene la soluzione tampone specifica, quindi il dispositivo viene acceso in modo che vi sia corrente elettrica e, di conseguenza, differenza di potenziale, che è importante per la separazione particelle in base al loro carico e dimensione. Il tempo di esecuzione elettroforetico varia in base allo scopo della procedura e può durare fino a 1 ora.
Dopo il tempo determinato, è possibile visualizzare il risultato della corsa elettroforetica attraverso il transilluminatore. Quando il gel viene posizionato alla luce UV o LED, è possibile visualizzare il modello di bande: più grande è la molecola, minore è la sua migrazione, si avvicina al pozzo, mentre più leggera è la molecola, maggiore è il potenziale migratorio.
Affinché la reazione sia validata, le bande del controllo positivo devono essere visualizzate e il controllo negativo non deve essere visualizzato, poiché altrimenti è un'indicazione che c'era contaminazione e l'intero processo deve essere ripetuto.
Tipi di elettroforesi
L'elettroforesi può essere eseguita per scopi diversi e, in base al suo obiettivo, possono essere utilizzati diversi tipi di gel, il più comune dei quali è poliacrilammide e agarosio.
L'elettroforesi per identificare i microrganismi è più comune da eseguire nei laboratori di ricerca, tuttavia, a fini diagnostici, l'elettroforesi può essere utilizzata per identificare le malattie ematologiche e le malattie che si evolvono con l'aumento della quantità di proteine, essendo i principali tipi di elettroforesi:
1. Elettroforesi dell'emoglobina
L'elettroforesi dell'emoglobina è una tecnica di laboratorio eseguita per identificare i diversi tipi di emoglobina che circolano nel sangue, consentendo di identificare la presenza di malattie correlate alla sintesi dell'emoglobina. Il tipo di emoglobina viene identificato mediante elettroforesi a un pH specifico, idealmente tra 8, 0 e 9, 0, con un modello di bande verificabili che possono essere confrontate con il modello normale, consentendo l'identificazione della presenza di emoglobine anomale.
A cosa serve: l' elettroforesi dell'emoglobina viene eseguita per studiare e diagnosticare malattie legate alla sintesi dell'emoglobina, come l'anemia falciforme e la malattia dell'emoglobina C, oltre a essere utile nel differenziare la talassemia. Scopri come interpretare l'elettroforesi dell'emoglobina.
2. Elettroforesi proteica
L'elettroforesi proteica è un esame richiesto dal medico per valutare la quantità di proteine circolanti nel sangue e, quindi, per identificare le malattie. Questo test viene eseguito da un campione di sangue, che viene centrifugato per ottenere il plasma, la parte del sangue costituita, tra le altre sostanze, dalle proteine.
Dopo l'elettroforesi, è possibile visualizzare un modello di bande e, successivamente, un grafico in cui è indicata la quantità di ciascuna frazione di proteine, fondamentale per la diagnosi.
A cosa serve: l' elettroforesi proteica consente al medico di indagare sulla presenza di mieloma multiplo, disidratazione, cirrosi, infiammazione, malattie del fegato, pancreatite, lupus e ipertensione in base al modello di banda e al grafico presentato nel rapporto dell'esame.
Comprendi come viene fatto e come comprendere il risultato dell'elettroforesi proteica.
